期刊简介
本刊是中华人民共和国卫生部主管、中华医院管理学会主办的国家级、国内外公开发行的综合性医学学术刊物，特点是药物密切联系临床。吴阶平副委员长任荣誉总编辑，28位中国科学院、中国工程院院士任本刊学术指导委员会委员。2001年12月创刊，双月刊，大16开，64页。2003年起页码增至80页。本刊以报道药物研究新发展、新动向、新技术，以及药物在临床应用与实践方面的最新动态为已任，以科学性、实用性为导向。读者对象主要为各医师、药师、药医教学及科研人员，药品研制、临床应用及监督管理人员。
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首页>中国药物与临床杂志
- 杂志名称：中国药物与临床杂志
- 主管单位：中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会
- 主办单位：中国医院协会
- 国际刊号：1671-2560
- 国内刊号：11-4706/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中国期刊全文数据库(CJFD)期刊收录：上海图书馆馆藏, 维普收录(中), CA 化学文摘(美), 国家图书馆馆藏, 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 知网收录(中), 万方收录(中)
串联表达Fas shRNA腺病毒载体的构建
刘明社；赵中夫；王兰；张国英；张芸；杨慧；封江南
关键词：抗原, CD95, shRNA(Short hairpin RNA), 腺病毒科
摘要：目的 利用串联表达质粒pEGFP6-1-siFas1+siFas2和BD Adeno-X系统构建腺病毒表达Fas-shRNA载体.方法 双酶切pEGFP6-1-siFas1+siFas2串联表达质粒和pShuttle2质粒,T4 DNA连接酶连接胶回收片段,转化感受态Escherichia coli(E.coli)DH5α菌株,挑取单克隆菌落LB(Luria-Bertani)培养基中扩增培养;小量质粒试剂盒提取pShuttle2-siFas1+siFas2质粒,酶切鉴定;双酶切pShuttle2-siFas1+siFas2质粒,T4 DNA连接酶连接酶切产物和腺病毒BD Adeno-X Viral DNA.回收连接产物,SwaI酶切去除未重组的腺病毒质粒,再回收酶切产物,转化感受态E.coli DH5α;聚合酶链反应(PCR)筛选鉴定阳性克隆;提取pAdeno-siFas1+siFas2质粒,进一步酶切鉴定;重组腺病毒pAdeno-siFas1+siFas2质粒线性化,经脂质体转染HEK 293A细胞;收细胞进行裂解收病毒.结果 构建表达2个Fas-shRNA的串联重组腺病毒载体pAdeno-siFas1+siFas2,经酶切鉴定和PCR分析,重组腺病毒质粒构建正确;经HEK293A细胞包装成功.结论 成功构建表达2个Fas-shRNA的串联重组腺病毒载体pAdeno-siFas1+siFas2,为进一步转染细胞和感染小鼠抑制Fas基因表达奠定了基础.
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